Повышение функциональной нагрузки на почку, оставшуюся после контрлатеральной нефрэктомии, сопровождается дисбалансом окислительно-восстановительных процессов в ее тканях [2,4,5], который значительно усиливается при токсическом воздействии 40% этанола, в связи с чем возникает необходимость производить коррекцию возникших нарушений в тканях веществами, обладающими универсальными протекторными свойствами -антиоксидантами.
«Эноант» – пищевой концентрат полифенолов винограда сорта “Каберне-Совиньон”, разработан в институте винограда и вина «Магарач». В пищевом концентрате «Эноант» присутствует весь спектр флаваноидной и нефлаваноидной групп полифенолов винограда, а также микроэлементы: Zn, Cu, Mn, Fe и др. Одним из основных свойств, характеризующих биологическую активность полифенолов винограда, является их способность ингибировать свободные радикалы, которые образуются при различных патологических состояниях человеческого организма [1,3].
Целью данного исследования было изучение цитохимической активности неитрофилов периферической крови при введении экспериментальным животным с единственной почкой концентрата полифенолов винограда «Эноант» после предварительной алкогольной интоксикации.
Материал и методы исследования
Для экспериментальных исследований были использованы 39 трехмесячных нелинейных белых крыс (самцов и самок), которые содержались в стандартных условиях вивариях, массой 160-200 г в трех сериях:
1 серия (14 крыс) производилось удаление левой почки при сохранении другой с послеоперационным ежедневным одноразовым внутрижелудочным зондовым введением 40% этанола из расчета 10 мл/кг массы тела животного в течение 3-х месяцев;
2 серия (15 крыс) удаление левой почки при сохранении правой контрлатеральной с послеоперационным ежедневным одноразовым внутрижелудочным зондовым введением 40% этанола с одномоментным введением концентрата полифенолов винограда «Эноант», растворенного в кипяченой воде из расчета суточной дозы 0,5 мл/кг массы тела животного в течение 3-х месяцев.
3 серия (контроль) -10 интактных здоровых животных. Забор периферической крови производился в первые сутки, в первую, вторую, третью недели, а также на 1, 2 и 3 месяцы
Проводилось определение дегидрогеназ в клетках периферической крови, которое заключается в том, что последние должны помещаться в среду, содержащую субстрат, кофермент, ингибитор ферментов, краситель. В указанной среде клетки крови инкубируются в течение 45-60 минут при температуре 37°С.
В качестве индикатора ферментного процесса использовали нитротетразолий синий (НСТ), образующий при восстановлении в клетке мелкие гранулы формазана и окрашивающий цитоплазму от дымчато-серого до насыщенного синего цвета. Тонкие нативные мазки крови, высушенные на воздухе, после соответствующей обработки инкубировали в течение 45 мин при температуре 37°С. Ядра клеток докрашивали раствором метилового зеленого. Высушенные мазки микроскопировали под иммерсионным объективом. Для оценки активности ферментов в клетках крови вычисляли средний цитохимический показатель (СЦП).
Математическую обработку результатов полученных данных производили методом вариационной статистики достоверными считали показатели при p1<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
К первым суткам после применения 40% этанола в нейтрофилах периферической крови крыс отмечался значительный цитохимический дисбаланс. Так показатель активности СДГ был ниже контроля на 4,2%, в то время как СЦП активности ЛДГ повысился по отношению к контролю незначительно на 0,9% (p1<0,05) (Таблица1). Аналогичные изменения наблюдались во второй серии опытов (Таблица 2).
К первой недели уровень дисбаланса в обеих сериях значительно не менялся. Ко второй неделе в обеих сериях отмечалось преобладание анаэробного гликолиза, что наиболее было выраженным в первой серии, где СЦП активности СДГ был на 18,8% ниже контроля (p1<0,05)., а СЦП активности ЛДГ – на 18,7% выше контроля (p1<0,05). К третьей неделе аналогичная тенденция сохранялась, однако во второй серии дисбаланс цитохимических
показателей был меньше по сравнению с контролем, чем в первой серии, так СЦП активности СДГ во второй серии был выше контроля на 4,2%, а СЦП активности ЛДГ ниже контроля на 9,4% (p1<0,05). К первому месяцу эта разница увеличилась, так СЦП активности СДГ во второй серии был выше контроля на 4,9%, а СЦП активности ЛДГ ниже контроля на 9,9% (p1<0,05).
Второй месяц явился переломным сроком для второй серии, что выражалось снижением дисбаланса цитохимических показателей, где СЦП активности СДГ был на 17,5% ниже контроля, а СЦП активности ЛДГ – на 16,9% выше контроля (p1<0,05). В первой серии итохимический дисбаланс по-прежнему оставался высоким и составлял для СЦП активности СДГ на 20,0% ниже контроля, а для СЦП активности ЛДГ – на 26,2% соответственно выше контроля (p1<0,01). Аналогичные тенденции продолжались вплоть до третьего месяца исследований, максимально приближаясь к показателям контроля во второй серии (таблица 2).
Таблица 1. Цитохимические показатели нейтрофилов периферической крови крыс после односторонней нефрэктомии на фоне интоксикации 40% этанолом (n =14, усл.ед.)
Показатели СЦП
|
Сроки наблюдений
|
||||||
1 сутки
|
1 неделя
|
2 недели
|
3 недели
|
1 месяц
|
2 месяца
|
3 месяца
|
|
СДГ
|
1,58±0,08
|
1,52±0,07
|
1,34±0,05 p1<0,05
|
1,26±0,09 p1<0,05
|
1,28±0,09 p1<0,05
|
1,32±0,10 p1<0,05
|
1,33±0,08 p1<0,05
|
ЛДГ
|
2,11±0,13
|
2,17±0,14
|
2,17±0,14 p1<0,05
|
2,53±0,10 p1<0,01
|
2,75±0,11 p1<0,001
|
2,69±0,12 p1<0,01
|
2,58±0,10 p1<0,05
|
Контроль СДГ ЛДГ
|
1,65± 0,09 2,13±0,11
|
|
|
|
|
|
Где p1 – достоверность по отношению к показателям контроля.
Таблица 2. Цитохимические показатели активности нейтрофилов периферической крови крыс после односторонней нефрэктомии на фоне интоксикации 40% этанолом с использованием антиоксиданта «Эноант» (n=15, усл.ед.)
Показатели СЦП
|
Сроки наблюдений
|
||||||
1 сутки
|
1 неделя
|
2 недели
|
3 недели
|
1 месяц
|
2 месяца
|
3 месяца
|
|
СДГ
|
1,59±0,08 p1>0,05
|
1,57±0,05 p1>0,05
|
1,45±0,08 p1>0,05
|
1,37±0,09 p1<0,05
|
1,33±0,09 p1<0,05
|
1,36±0,05 p1<0,05
|
1,38±0,07 p1<0,05
|
ЛДГ
|
2,12±0,10 p1>0,05
|
2,15±0,12 p1>0,05
|
2,33±0,13 p1>0,05
|
2,51±0,10 p1<0,05
|
2,54±0,11 p1<0,05
|
2,49±0,12 p1<0,05
|
2,47±0,10 p1<0,05
|
Контроль СДГ
ЛДГ
|
1,65± 0,09 2,13±0,11
|
|
|
|
|
|
Где p1 — достоверность по отношению к показателям контроля.
Таким образом, применение концентрата полифенолов винограда «Эноант» существенно уменьшает цитохимический дисбаланс нейтрофилов периферической крови крыс после односторонней нефрэктомии на фоне интоксикации 40% этанолом, что проявляется в уменьшении СЦП ЛДГ, который является индикатором интенсивности анаэробных процессов.
Библиографический список
- Авидзба A.M., Иванченко В. И., Загоруйко В. А., Огай Ю. А. Перспективы разработки новых биологически активных продуктов питания на основе винограда. //Биологические активные природные соединения винограда: перспективы производства и применения в медицине и питании. -Симферополь, 2001. – с. 6-7.
- Западнюк И.П. с соавт. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Киев, «Вища школа», 2003.-350 с.
- Лазарев К.Л., Жукова А.А., Лященко О.И. Состояние компенсаторных процессов в почке после нефрэктомии при введении в организм этанола в эксперименте // Проблемы, достижения и перспективы развития медико-биологических наук и практичекого здравоохранения, – 2006, т. 142, ч.1. – С. 47-53.
- Лазарев К.Л., Жукова А.А., Лященко О. И. Сравнительная морфометрическая характеристика отделов нефрона единственной почки при воздействии этанола и эноанта // Таврический медико-биологический вестник. – 2006. – Т. 9, ч. 1, № 3. – С. 31-35.
- К. L. Lazarev, A. A. Zhukova, O.I. Lyashchenko, А.А. Semko, K. A. Leieko Comparative morphometrical characteristics of nephron parts in introduction of ethyl alcohol and ” Enoant’”(experimental research). Таврический медико-биологический вестник. – 2007.- Т. 10, №3. – С. 169-172.
Количество просмотров публикации: Please wait