В соответствии с эндотоксиновой теорией М. Ю. Яковлева [1, с. 98-109], липополисахарид (ЛПС) кишечной микрофлоры в незначительных количествах проникает в системный кровоток и оказывает общее стимулирующее действие, поддерживая различные звенья клеточного и гуморального иммунитета в состоянии физиологического тонуса. При стрессах различного генеза (в том числе физической нагрузки) и действии различных экологически неблагоприятных факторов проникновение эндотоксина из кишечника в кровоток значительно увеличивается, что может приводить к развитию «эндотоксиновой агрессии», которая, в свою очередь, может заканчиваться развитием диссеминированного внутрисосудистого свертывания, эндотоксинового шока и полиорганной патологии [2, 3] .

Цель работы – уточнить состояния иммунного статуса спортсменов по показателям специфического гуморального иммунитета исследуемых групп к грамотрицательным микроорганизмам и бифидумбактериям.

Методика исследования. Проведено изучение содержания эндотоксина грамотрицательных бактерий кишечника (ЭТ) в плазме крови и показателей гуморального звена антиэндотоксинового иммунитета у 64 спортсменов: баскетболистов (n=20), легкоатлетов (n=18), тяжелоатлетов (n=13), триатлонистов (n=13). Средний возраст обследуемых – 18,6±1,2 лет. Контрольную группу составили практически здоровые, не занимающиеся никаким видом спорта студенты (n=34). Средний возраст этих испытуемых – 18,5±0,5 лет. В качестве показателей нормы были приняты результаты обследования практически здоровых людей в возрасте 20-40 лет (n=30). В качестве стандартной нагрузки использовали тест PWC₁₇₀.Определение PWC₁₇₀ проводили на велоэргометре “Sven sport” (Швеция,1988). Во время проведения теста регистрировали мощность нагрузки и рассчитывали физическую работоспособность по стандартной формуле.

Методы диагностики системной эндотоксинемии и активности антиэндотоксинового иммунитета (АЭИ) разработаны сотрудниками Института общей и клинической патологии КДО РАЕН (Патенты РФ №№ 2011993, 2088936, 2093825).  Наиболее распространенным в мировой исследовательской практике способом определения ЛПС в жидких средах, в том числе в циркулирующей крови, является лимулюс-тест (ЛАЛ-тест), основанный на способности ЛПС вызывать коагуляцию белковых фракций лизата амебоцитов краба Limulus polyphemus [4, P. 2477-2483]. Однако он имеет ряд недостатков, которых во многом лишен его аналог (модификация) – Микро-ЛАЛ-тест. Микро-ЛАЛ-тест позволяет оценивать реакцию при концентрации эндотоксина 0,01EU ЛПС в 1мл крови [5,  с.7-10; 6].

Определение активности гуморального звена АЭИ стало возможным с появлением “СОИС-ИФА” (скрининг оценки иммунного статуса в иммуноферментном анализе). Скрининговая диагностическая технология основана на определении антиэндотоксиновых антител к наиболее общим антигенным детерминантам ЛПС, а именно: к Re-гликолипиду, содержащему в своей структуре исключительно липид-А и три остатка кетодезоксиоктулоновой кислоты, входящему в состав ЛПС всех грамотрицательных бактерий; и ЛПС E.coli 014, который содержит антиген Кунина (общий антиген энтеробактерий) [7]. При обследовании здоровых доноров были определены средние показатели нормы: содержание антител к Re-гликолипиду (показатель А₁ - 200 у.е.О.П.), содержание антител к ЛПС E.coli 014 ОАЭ (показатель А₂ - 400 у.е.О.П.), соотношение А₂/А₁ (показатель А₃) - 2/1.

Определение активности специфического антибактериального гуморального иммунитета проводили в иммуноферментном анализе,  определяли  концентрации антибактериальных антител к следующим антигенам условно патогенных бактерий: синегнойной палочке (норма – 12,9-15,4 мкг/мл), кишечной палочке (норма – 13,2-14,9 мкг/мл), протею (норма – 10,4-12,6 мкг/мл), бактероидам (норма – 5,3-5,7 мкг/мл), клебсиелле (норма – 23,2-26,6 мкг/мл), бифидумбактериям (норма – 3,6-4,6 мкг/мл) и к антигенам кандиды (норма – 24,2-26,2 мкг/мл).

Статистическую обработку данных проводили с использованием программы MS Excel (Ver.5.0.) при уровне значимости р£0,05.

Результаты и их обсуждение.  Методика “СОИС-технология” была разработана главным врачом клиник №1 и №2 Московского института общей и клинической патологии Клинико-диагностического общества, кандидатом медицинских наук И.А. Аниховской [8]. Согласно методике на основании результатов определения показателей содержания двух видов антиэндотоксиновых антител, данные обследуемого могут быть отнесены к одной из 11 групп здоровья. После распределения обследуемых по группам оценки состояния здоровья по “СОИС-технологии” нами не выявлено испытуемых, которых можно было включить в 3,4,7,10 и 11 группы, что указывает на отсутствие видимых отклонений в состоянии здоровья.

Для уточнения состояния иммунного статуса спортсменов мы изучили специфический гуморальный иммунитет к грамотрицательным микроорганизмам и бифидумбактериям.

В 1 и 6 группах здоровья концентрации антител к антигенам синегнойной палочки были незначительно повышены, а в остальных группах – снижены. Значимое снижение концентрации антител к антигенам синегнойной палочки отмечали во 2 и 9 группах здоровья по отношению к показателям условно здоровых волонтеров. Значимое повышение концентрации антител к антигенам протея установлено в 6 группе. Концентрации антител к антигенам бактероидов были значимо повышены (в 1,5-2 раза) в 1, 2 и 6 группах по сравнению с показателями условно здоровых волонтеров и значимо снижены в 9 группе по сравнению с другими группами здоровья. Значимое снижение концентрации антител (в 4-5 раз) к антигенам клебсиеллы отмечали в 1 и 2 группах здоровья, а повышение титров – в 6 и 9 группах.

При анализе концентрации антибифидумных антител установили разнонаправленные изменения: значимые повышения (в 1,5-2 раза) в 6 и 8 группах на фоне пониженных концентраций в 1, 2 и 9 группах по сравнению с показателями условно здоровых волонтеров. Во всех группах отмечали повышенные концентрации антикандидозных антител. Значимые повышения выявлены в 5,6,8,9 группах здоровья по сравнению с остальными группами.

Таким образом, до выполнения физической нагрузки по показателям концентрации антител к изученным антигенам нами были установлены серологические признаки вторичного иммунодефицита в 5,6,8,9 группах, признаки дисбактериоза – в 5 и 6 группах.

Значимое повышение концентрации антител к антигенам синегнойной палочки было установлено в 6 группе. Значимо сниженными концентрации антител к антигенам синегнойной палочки оставались во 2 и 9 группах, как по отношению к другим группам здоровья, так и по сравнению с показателями условно здоровых волонтеров. Существенной динамики изменения концентрации антител к антигенам протея после выполнения физической нагрузки не выявлено. После выполнения физической нагрузки также не установлено существенной динамики в изменении концентрации антител к антигенам бифидумбактерий. По-прежнему, концентрации антител сохранялись повышенными в 6 и 8 группах здоровья и пониженными – в 9 группе по сравнению с показателями условно здоровых волонтеров. При сравнении концентрации антител к антигенам клебсиеллы после выполнения физической нагрузки установили, что сохранились значимые снижения концентраций (в 4-5 раз) в 1 и 2 группах здоровья по сравнению с показателями условно здоровых волонтеров и остальными группами здоровья. Концентрации антикандидозных антител после выполнения физической нагрузки продолжали оставаться повышенными во всех группах. В 5,6,8,9 группах здоровья отмечали значимые повышения концентраций по сравнению с остальными группами, а в 1, 6 и 9 группах – выявляли тенденцию к нарастанию концентраций антикандидозных антител. Следовательно, после физической нагрузки по показателям антител к изученным антигенам были установлены серологические признаки вторичного иммунодефицита в 5,6,8,9 группах, признаки дисбактериоза – в 5, 6 и 8 группах. Серологическими факторами дисбактериоза, а, следовательно, и эндотоксиновой агрессии (ЭА) могут быть следующие грамотрицательные микроорганизмы: в 5 группе здоровья – протей, бактероиды; в 6 группе здоровья – синегнойная палочка, протей, бактероиды; в 8 группе здоровья – бактероиды. После выполнения физической нагрузки, выявленные изменения нарастали, это подтверждает тот факт, что физическая нагрузка является стрессорным фактором и при определенных условиях может явиться причиной развития эндотоксиновой агрессии.

В связи с доказанной ролью ЭТ кишечной микрофлоры в развитии общего адаптационного синдрома и, в частности, реакций дизадаптации на физическую нагрузку возникает необходимость в разработке антиэндотоксинового направления в спорте. Суть этого направления основана на использовании средств и процедур, позволяющих предупреждать поступление в системный кровоток избытка кишечного ЛПС, интенсифицировать процессы связывания и элиминации ЭТ из системного кровотока для профилактики срыва адаптивно-приспособительных механизмов организма человека под контролем скрининговых диагностических эндотоксин-тест-систем.

Дополненные антиэндотоксиновой составляющей мероприятия включают в себя использование антиэндотоксиновых препаратов: иммуномодуляторов, эубиотиков, энтеросорбентов, аминокислот, в том числе из морепродуктов.

1. Яковлев М. Ю. Элементы эндотоксиновой теории физиологии и патологии человека //Физиология человека. 2003. Том 29. №4.
2. Опарина О.Н.  Биологические свойства эндотоксина кишечной микрофлоры // Современные научные исследования и инновации. Январь 2014. №1 [Электронный ресурс]. URL: http://web.snauka.ru/issues/2014/01/31034
3. Опарина О.Н.  Роль эндотоксина грамотрицательных бактерий кишечника в физиологических и патологических проявлениях стресса // Современные научные исследования и инновации. Май 2014. № 5 [Электронный ресурс]. URL: http://web.snauka.ru/issues/2014/05/32845
4. Roslansky P. F., Novitsky T. J. Sensitivity of Limulus amoebocyte lysate (LAL) to LAL-reactive glucans // J. Clin. Microbiol. 1991. V.29.
5. Пермяков Н.К., Аниховская И.А, Анохин В.А. и др. Диагностика системной эндотоксинемии // Актуальные проблемы общей и частной патологии. Сб. трудов НИИ морфологии человека РАМН. М. 1993.
6. Яковлев М.Ю. Системная эндотоксинемия в физиологии и патологии человека. // Автореф. дисс. … д-ра мед. наук. М.  1993.  55с.
7. Уразаев Р.А., Яковлев М.Ю., Аниховская И.А. и др. Способ оценки резистентности организма (SOIS-IFA). Патент РФ № 2011913. 1994.
8. Аниховская И.А. Выявление групп риска, выбор тактики обследования и оценка эффективности лечения различных заболеваний по показателям антиэндотоксинового иммунитета // Автореф. …канд. мед. наук.  М. 2001.  19с.

Все статьи автора «Опарина Ольга Николаевна»