В обмене входящих в состав эфиров холестерина и триглицеридов высших жирных кислот принимает участие карнитин, способный синтезироваться в клетках из метионина и лизина, а также поступающий в организм в составе продуктов питания. Оценка плазменной концентрации карнитина у пациентов с хронической алкогольной интоксикацией показала длительное, сохраняющееся в течение двух месяцев после заключительного приема алкоголя снижение уровней общего, свободного и ацилкарнитина [3, с. 548]. Изменение уровня карнитина в плазме сопровождались аналогичным снижением экскреции данного метаболита у больных алкоголизмом [4, с. 160]. Очевидно, что функциональная активность и эффективность действия карнитина в данных условиях будет снижена и может предопределить изменения других показателей обмена липидов.

Цель исследования: оценить воздействие L-карнитина на уровень показателей липидного обмена в крови при моделировании синдрома отмены этанола.

Задачи исследования:

1. Выяснить содержание триглицеридов в сыворотке крови при формировании синдрома отмены этанола в условиях применения L-карнитина;
2. Оценить воздействие L-карнитина на уровень общего холестерина в сыворотке крови при экспериментальном синдроме отмены этанола;
3. Определить содержание холестерина в липопротеинах высокой плотности в сыворотке крови при использовании L-карнитина условиях моделирования физической зависимости от алкоголя.

Материалы и методы исследования

В эксперименте использовали 30 беспородных крыс-самцов массой 180-200 г. Для формирования физической зависимости от этанола использовали модель экспериментального алкоголизма, разработанную проф. Абдрашитовым А.Х. и соавт. [5, c. 85-89]. Согласно этой модели, животным интрагастрально вводили 25% раствор этанола в дозе 8 г/кг в сутки в течение 4 суток и 4 г/кг/сут на 5 сутки (группа «Этанол»). Для оценки влияния L-карнитина (препарат «L-КАР») на показатели липидного обмена в период реакции отмены этанола была сформирована группа животных, которым интрагастрально вводили «L-КАР» в дозе 300мг/сут в период моделирования реакции отмены (группа «Этанол+L-КАР»). Выведение животных из эксперимента осуществлялось путем декапитация под эфирным наркозом через 1 сутки после последнего введения алкоголя. Группу сравнения составили животные, которым по аналогичной схеме вводили эквиобъемное количество воды. Определение содержания триглицеридов, концентрации общего холестерина и холестерина в липопротеинах высокой плотности в сыворотке крови проводилось с использованием наборов реагентов компании «Вектор-Бест». Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью компьютерных программ AnalystSoft Inc., Statplus, версия 5 и Microsoft Excel. В качестве основных характеристик описательной статистики применяли медиану (Ме), нижний 25-й (L) и верхний 75-й (Н) квантили (Me; L; H). Оценку статистической значимости различий проводили с использованием непараметрических критериев: Манна-Уитни (U) и Вилкоксона для связанных выборок (W).

Результаты исследования и их обсуждение

Синтетический аналог естественного L-карнитина применяется в лечебной практике с целью воспроизведения и усиления его физиологической функции – обеспечение транспорта в матрикс митохондрий клеток организма человека для последующего метаболического процесса β-окисления насыщенной пальмитиновой кислоты. В условиях моделирования действия этилового алкоголя на клеточные компоненты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии было установлено его влияние в отношении фосфолипидов цитоплазматических мембран. L-карнитин уменьшал уровень фосфолипидов, соответственно влияя на жидкостность мембран гепатоцитов [6, c. 44].

Несмотря на литературные данные о недостаточной концентрации карнитина в плазме крови, уменьшении параметров его выделения при хронической алкогольной интоксикации и возможного, вследствие этого, изменения важнейших показателей, характеризующих обмен липидов, измерение содержания общего холестерина, холестерина липопротеинов высокой плотности, триглицеридов в сыворотке крови животных, подвергшихся принудительной алкоголизации (группа «Этанол»), позволило выявить лишь тенденцию к увеличению всех вышеперечисленных показателей.

Данные настоящего исследования соотносятся с тем, что экспериментальное, длительностью один месяц моделирование хронического влияния этанола также не выявило изменений в уровнях общих липидов и триглицеридов в плазме лабораторных животных [7, c. 56]. Отсутствие изменений концентраций общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови при экспериментальном воспроизведении физической зависимости от алкоголя может быть связано с тем, что этиловый спирт: а) сначала заменяет высшие предельные жирные кислоты в качестве основного внутриклеточного энергетического субстрата; б) затем ускоряет этерификацию высших жирных кислот с образованием эфиров холестерина и триглицеридов в клетках; и в) аккумулирует их в гепатоцитах.

В группе «Этанол+L-КАР» было установлено статистически значимое повышение содержания холестерина липопротеинов высокой плотности на 6,8% (pU=0,049) по сравнению группой контрольных животных и составило 0,63 (0,62;0,63) ммоль/л. Также нами были выявлены изменения в уровне триглицеридов в сыворотке крови данной группы животных по сравнению с группой «Этанол». Содержание триглицеридов было снижено на 16,7% (pW=0,022) и составило 0,5 (0,4; 0,5) ммоль/л.

Причины повышения уровня холестерина липопротеинов высокой плотности при развитии реакции отмены этанола на фоне использования L-карнитина могут быть связаны: во-первых, с тем, что из-за увеличенного транспорта карнитином насыщенной пальмитиновой кислоты в матрикс митохондрий для окисления в формировании эфиров холестерина и триглицеридов будут участвовать в большем количестве ненасыщенные и полиненасыщенные высшие жирные кислоты, которые в данных условиях в значительной степени необходимы для оптимальных параметров паракринной регуляции клеточного метаболизма эйкозаноидами и которые транспортируются липопротеинами высокой плотности; во-вторых, с тем, что в условиях избыточного образования ацетил-КоА при алкоголизме происходит трансформация его использования в клетке с усилением пути образования холестерина, избыток которого из клеток также ответственны удалять липопротеины высокой плотности.

Снижение содержания триглицеридов, вероятно, обусловлено тем, что предполагаемая под действием L-карнитина интенсифицированная доставка пальмитата в митохондрии сопряжена с усилением в условиях хронической алкогольной интоксикации периферического липолиза триглицеридов и высвобождением в кровь свободных, неэтерифицированных жирных кислот.

Таким образом, можно сделать заключение об определенном модулирующем эффекте L-карнитина в условиях экспериментального алкоголизма на показатели сыворотки крови, характеризующие состояние обмена липидов.

Поскольку существует явная возможность попробовать применить положения теории биологических функций и биологических реакций к рассмотрению алкоголь-ассоциированных метаболических нарушений при столь же явной и нерешенной проблеме алкоголизма, то существующее положение вещей предрасполагает к оценке биохимических показателей при алкогольной аддикции с несколько иных позиций.

Цель исследования: оценить влияние предшественника восстановленного глутатиона на содержание мочевой кислоты в крови при алкогольном абстинентном синдроме.

Задачи исследования:

1. Выяснить динамику уровня мочевой кислоты в сыворотке крови при формировании алкогольной абстиненции;
2. Оценить воздействие предшественника восстановленного глутатиона на содержание мочевой кислоты в сыворотке крови у больных алкоголизмом.

Материалы и методы исследования

Проведено исследование уровня мочевой кислоты в сыворотке крови пациентов наркологического диспансера с диагнозом: «Психические и поведенческие расстройства в результате употребления алкоголя, средняя стадия. Синдром активной зависимости. Состояние отмены, неосложненное, средней степени тяжести» (F.10.242, F.10.302), выборка которых была сформирована в соответствии с критериями включения и исключения.

Критерии включения: возраст 35-50 лет; состояние алкогольной абстиненции при поступлении в стационар; информированное согласие пациента (или его родственников) на проведение исследования.

Критерии исключения: наличие аллергических, эндокринных или других заболеваний, способных оказать влияние на течение основного заболевания и результат исследования; прием наркотических и психотропных средств до поступления в стационар; отказ от участия в исследовании (по результатам беседы с пациентом или его родственниками).

С использованием этих критериев были сформированы группы больных, у которых взятие крови для исследования проводился в 1 (группа А1, n=12), 3 (группа А3, n=12), 7 (группа А7, n=12) и 10 (группа А10, n=12) сутки после поступления в стационар. Купирование абстинентных расстройств проводилось обычными медикаментозными средствами (дезинтоксикация, седативная терапия, витаминотерапия).

Для оценки влияния предшественника восстановленного глутатиона (препарат «Глутоксим») на динамику содержания мочевой кислоты были сформированы группы больных, у которых в лечении, дополнительно к стандартной схеме, использовали «Глутоксим», который вводили в течение 10 суток с момента поступления пациентов в стационар, внутривенно, в дозе 15 мг в сутки. Взятие крови у данных пациентов проводилось в 1 (группа А1+Г, n=10), 3 (группа А3+Г, n=10), 7 (группа А7+Г, n=10) и 10 (группа А10+Г, n=10) сутки лечения. Группу сравнения (группа К) составили 10 условно здоровых лиц аналогичной возрастной категории.

Определение содержания мочевой кислоты в сыворотке крови проводилось с использованием набора реагентов компании «Вектор-Бест». Принцип метода основан на том, что мочевая кислота под влиянием уриказы окисляется кислородом воздуха с образованием углекислого газа, аллантоина и пероксида водорода. Последний при взаимодействии с дихлоргидроксибензолсульфонатом в присутствии аминоантипирина образует хинонимин – окрашенный продукт. Интенсивность окраски реакционной смеси прямо пропорциональна концентрации мочевой кислоты в пробе. Содержание мочевой кислоты рассчитывали с учетом концентрации мочевой кислоты в калибраторе, равной 500, и выражали в мкмоль/л.

Статистическая обработка полученных данных проводилась с помощью компьютерных программ AnalystSoft Inc., Statplus, версия 5 и Microsoft Excel. В качестве основных характеристик описательной статистики применяли медиану (Ме), нижний 25-й (L) и верхний 75-й (Н) квантили (Me; L; H). Оценку статистической значимости различий проводили с использованием непараметрических критериев: Манна-Уитни (U) и Вилкоксона для связанных выборок (W) [7].

Результаты исследования и их обсуждение

Уровень мочевой кислоты в сыворотке крови у больных алкоголизмом при развитии алкогольной абстиненции составил: в группе «А1» 331,6 (282,5; 349,2) мкмоль/л, что на 31,3 % (pU=0,0033) выше, чем в группе сравнения.; в группе «А3» 308,6 (296,5; 332,1) мкмоль/л, что также на 20,9 % (pU=0,0033) выше, чем в группе сравнения; в группе «А7» 274,8 (257,2; 249,9) мкмоль/л; в группе «А10» 276,9 (253,1; 299,6) мкмоль/л. Статистически значимых отличий от группы контроля в группах «А7» и «А10» не выявлено (pU=0,1294 и pU=0,1379, соответственно).

При введении предшественника восстановленного глутатиона в схему лечения пациентов в группе «А1+Г» сохраняется повышенным уровень мочевой кислоты на 17,4 % (pU=0,0252) по сравнению с контролем и составляет 299,6 (267,0; 321,8) мкмоль/л. В группах «А3+Г», «А7+Г», «А10+Г» содержание мочевой кислоты составило 270,7 (260,8; 291,3) мкмоль/л; 276,9 (256,2; 319,2) мкмоль/л; 282,2 (261,4; 304,8) мкмоль/л, соответственно. Достоверных статистических отличий в этих группах от группы сравнения не выявлено (pU=0,1041; pU=0,0588; pU=0,0640, соответственно).

Статистически значимых отличий в группах пациентов с использованием в схеме лечения предшественника восстановленного глутатиона от групп больных, получавших стандартную терапию, при применении критерия Вилкоксона выявлено не было (pW=0,3081; pW=0,0858; pW=0,4755; pW=0,8127, соответственно).

Соединения эндогенного характера можно отнести к группе антиоксидантов в том случае если: 1) для вещества характерно наличие высокой концентрации в тканях и/или биологических жидкостях; 2) молекулы предполагаемого антиоксиданта способны связываться с соединениями, обладающими прооксидантными свойствами; 3) в результате реакции формируются менее химически агрессивные структуры [8, с. 615-631] .

После утраты в филогенезе клетками организма человека возможности образовывать аллантоин из-за прекращения синтеза фермента уриказы (уратоксидазы) [9, с. 78] и потери способности формировать аскорбиновую кислоту [10,с. 53] концентрация мочевой кислоты в крови стала значительно более высокой по сравнению с другими видами животных.

Реализация антиоксидантного действия мочевой кислоты обеспечивается ее присутствием в плазме крови на 98% в виде натриевой соли в состоянии диссоциации. В результате чего отмечается нахождение мочевой кислоты в кров, моче в виде одновалентного урат-аниона, который обладает повышенной стабильностью и не дает каскада цепных реакций образования перекисных радикалов [5, с. 284].

Умеренное потребление слабоалкогольных напитков не коррелирует с высокой концентрацией мочевой кислоты в сыворотке крови [11, c. e97646] и даже может вызывать снижение ее концентрации при экспериментах с оценкой влияния этанола на биохимические показатели крови [12, с. 408].

Отмечается, что хроническая алкогольная интоксикация ассоциирована с повышением содержания уратов в сыворотке крови вследствие: а) усиленного распада адениловых нуклеотидов с образованием предшественников мочевой кислоты [13, с. 457], [14, с. 477], б) ингибирования их экскреции с мочой [15, с. 3369], в) развития кетоацидоза [16, с. 35] с последующей г) интенсификацией формирования молочной кислоты и возникновением лактат-ацидоза, в результате которого проявляется антиурикозурическое действие лактата – подавление постреабсорбционной секреции уратов в проксимальных почечных канальцах [17, с. 563].

Понижение секреции уратов могут развиваться в условиях нарушения окисления клетками масляной кислоты с образованием кетоновых тел, которые вытесняют мочевую кислоту из связи с котранспортерами мочевой кислоты и органических анионов и переносятся в первичную мочу, а мочевая кислота эпителия проксимальных канальцев.

Повышение уровня мочевой кислоты в ранние сроки развития алкогольной абстиненции могут быть рассмотрены с положительной стороны в аспекте реализации мочевой кислотой своей антиоксидантной функции, связанной с активностью в отношении различных свободнорадикальных субстанций [18, с. 58]. Дальнейшее возвращение содержания мочевой кислоты к данным контрольной группы может обусловлено тем, что активные формы кислорода окисляют мочевую кислоту с образованием аллантоина [19, с. 720], [20, с. 667].

Повышение содержания метаболитов в межклеточной среде многоклеточного организма (в том числе, мочевой кислоты) предполагает запуск и реализацию биологической функции эндоэкологии – поддержания «чистоты» межклеточной среды – для предотвращения превышения соответствующей нормы для того или иного параметра. «Замусоривание» (littering) межклеточной среды предопределяет необходимость удаления ненужных веществ по механизму усиления гломерулярной фильтрации, что отражено в лабораторном тесте микроальбуминурии. Предполагают, что сопряженность данных процессов связана с увеличением давления крови в пуле внутрисосудистой жидкости (артериального давления); следующего вслед за этим усилением клубочковой фильтрации и нарушением полной реабсорбции альбумина из первичной мочи [5, c. 32,33].

Как при повышении содержания мочевой кислоты в крови отмечаются позитивные корреляции с увеличением концентрации С-реактивного белка [5, с. 295], развитием микроальбуминурии [21, с. 458], повышением артериального давления [22, с. 1466], так и при алкоголизме выявляется активация острофазовых белков [23, с. 309], выделение в составе мочи белков [26, с. 464] и симптомы артериальной гипертонии [25, с. 346].

Таким образом, можно предполагать, что в условиях алкогольной зависимости происходят определенные изменения в плане выполнения организмом по крайней мере биологических функций трофологии эндоэкологии.

При использовании в схеме лечения предшественника восстановленного глутатиона соответствие концентрации в сыворотке крови мочевой кислоты значениям группы сравнения происходит раньше. Вероятно, это изменение может быть связано с тем, что в результате превращения препарата при участии глутатионредуктазы образующийся восстановленный глутатион «берет на себя» определенную часть антиокислительной защиты, а повышенное количество мочевой кислоты в крови элиминируются реализации биологической функции эндоэкологии в биологической реакции экскреции.