, где (1)

V – объем раствора перманганата калия (0,02 моль/л), израсходованного на титрование извлечения, мл;
 – объем раствора перманганата калия (0,02 моль/л), израсходованного на титрование в контрольном опыте, мл; 
0,004157 – количество дубильных веществ, соответствующее 1 мл раствора перманганата калия (0,02 моль/л) (в пересчете на танин), г; 
250 – общий объем извлечения, мл; 
25 – объем извлечения, взятого для титрования, мл.
m – масса сырья, г;
W – потеря в массе при высушивании сырья, г; 
Для количественного определения дубильных веществ методом спектрофотометрии, около 1 г (точная навеска) исследуемого растительного сырья, измельченного до размера частиц, проходящих через сита с размером отверстий 1 мм, помещали в коническую колбу со шлифом вместимостью 50 мл, добавляли 25 мл смеси ацетон-вода в соотношении 7:3 (70% раствор ацетона). Колбу закрывали и помещали в лабораторное перемешивающее устройство (ЛАБ ПУ-2, Россия) на 60 минут. Полученное извлечение фильтровали в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводили объем до метки 70% раствором ацетона (раствор А).
В мерную колбу вместимостью 10 мл помещали 1 мл раствора А, объем раствора в колбе доводили водой очищенной до метки (раствор Б).
0,5 мл раствора Б помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, добавляли 2 мл воды очищенной, 0,25 мл реактива Фолена-Чокальтеу, 1,25 мл 20% раствора натрия карбоната и доводили объем раствора водой до метки. Колбу оставляли на 40 минут в защищенном от света месте. Оптическую плотность раствора определяли при длине волны 750 нм. В качестве раствора сравнения использовали смесь реактивов без добавления извлечения.
Содержание дубильных веществ в извлечениях из растительного сырья рассчитывали по значениям градуировочного графика для построения которого, использовали 0,1 мг/мл раствор стандартного образца CO танина. С этой целью 0,05 г (точная масса) CO танина помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 30 мл воды и объем в колбе доводили тем же растворителем до метки (раствор A). 
1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл. Объем раствора в колбе доводили водой до метки (раствор Б).
Серию растворов, содержащих по 1; 2; 3; 4; 5 мкг/мл CO танина готовили, помещая навески раствора Б в мерные колбы вместимостью 10 мл, прибавляли реактив Фолина–Чокалтеу и 20% водный раствор натрия карбоната, объем растворов в колбе доводили водой до метки. 
Растворы перемешивали, колбы укупоривали и выдерживали при комнатной температуре в защищенном от света месте в течение 40 мин.
Оптическую плотность полученных растворов определяли спектрофотометрически в кварцевых кюветах с толщиной слоя 1 см при длине волны 725 нм относительно раствора сравнения.
Раствор сравнения представлял собой смесь реагентов без добавления CO танина (раствор B). 
По результатам проведенных исследований строили график зависимости оптической плотности от концентрации танина (рис.1). 

С учетом полученных значений рассчитывали сумму дубильных веществ, в пересчете на танин по формуле:

, где

с – содержание дубильных веществ, найденное по градуировочному графику, мкг/мл;
F – фактор разведения;
а – навеска сырья, г;
b – потеря в массе при высушивании (%).

Результаты
Результаты количественного определения дубильных веществ методом титрования представлены в табл. 1.

Масса навески растительного сырья, г	Объём перманганата калия (0,02 моль/л), израсходованного на титрование полученного извлечения из растительного сырья, мл	Количество дубильных веществ, % (Xi)	Метрологические характеристики
2,10250	7,4	15,34892	= 15,72%  0,154 Δ = 0,395 ε = 2,52% Sr = 0,024
2,03255	7,4	15,21262
2,18345	8,2	15,84713
2,24350	8,6	16,24333
2,12465	8,0	15,85257
2,07055	7,6	15,80574

Среднее значение содержания дубильных веществ в сырье составило 15,7%. Рассчитанное значение величины относительного стандартного отклонения (0,024%), которое не превышает 2%, что характеризует удовлетворительную сходимость полученных результатов.
Для определения правильности методики использовали метод добавки. С этой целью в колбу для титрования добавляли по 1 мл 0,05%, 0,1% и 0,15% CO танина и титровали трижды для каждого случая. Результаты проведенных исследований представлены в табл. 2.

Количество добавленного СО танина, г	Масса сырья, г	Рассчитанноеколичество дубильных веществ, г	Найденное количество дубильных веществ, г	Открываемость, %	Метрологические характеристики
0,0005	2,2435	0,0357	0,0353	98,87	= 99,91%  1,198  0,399 tрасч.=0,23 tтабл.=2,31
	2,1247	0,0339	0,0340	100,29
	2,0706	0,0330	0,0337	102,12
0,001	2,2435	0,0362	0,0357	98,61
	2,1247	0,0344	0,0340	98,84
	2,0706	0,0335	0,0336	100,51
0,0015	2,2435	0,0367	0,0366	99,73
	2,1247	0,0349	0,0353	101,14
	2,0706	0,0340	0,0337	99,12

Полученные результаты свидетельствуют о том, что рассчитанный коэффициент Стьюдента меньше табличного значения и методика не содержит систематической ошибки, что позволяет сделать вывод о ее правильности.
Для изучения линейности определяли зависимость найденных значений количественного содержания дубильных веществ от навески исследуемого растительного сырья. С этой целью проводили количественное определение танинов в шести навесках воздушно–сухого сырья манжетки обыкновенной, отличающихся по массе (табл. 3).

По полученным в ходе проведенных исследований данным строили график зависимости определенного содержания дубильных веществ от массы навески исследуемого растительного сырья (рис. 2) и рассчитывали коэффициент корреляции.

Рассчитанный коэффициент корелляции не превышал 0,95, что свидетельствует о линейности результатов определения содержания исследуемых веществ от массы навески анализируемого растительного сырья в обозначенном интервале концентраций.
Результаты количественного определения дубильных веществ в воздушно сухом сырье травы манжетки обыкновенной методом спектрофотометрии представлены в табл. 4.

Масса навески, г	Оптическая плотность раствора	Содержание дубильных веществ по градуировочному графику мкг/мл	Найденное количество дубильных веществ, % (Xi)	Метрологические характеристики
1,02755	0,5957	7,30920	7,87340	= 7,84%  0,11 Δ = 0,28 ε = 3,61% Sr =0,034%
0,99745	0,6130	7,52147	8,34656
1,0068	0,5678	6,96687	7,65932
0,99580	0,5742	7,04539	7,83120
1,0060	0,5750	7,05521	7,76261
1,00670	0,5617	6,89202	7,57779

Среднее значение содержания дубильных веществ в растительном сырье составляет 7,8% при относительном стандартном отклонении (0,034%), не превышающем 2%, что характеризует удовлетворительную сходимость результатов.
Для определения правильности методики использовали метод добавки. С этой целью в колбу с первичным ацетоновым извлечением добавляли по 1 мл 0,05%, 0,1% и 0,15% раствора CO танина и далее проводили количественное определение дубильных веществ трижды для каждой концентрации. Результаты проведенных исследований представлены в табл. 5.

Количество добавленного СО танина, г	Масса сырья, г	Рассчитанное количество дубильных веществ, г	Найденное количество дубильных веществ, г	Открываемость, %	Метрологические характеристики
0,0005	1,0068	0,0794	0,0803	101,13	= 99,96%  0,948  0,316 tрасч.=0,13 tтабл.=2,31
	1,0060	0,0794	0,0790	99,50
	1,0276	0,0811	0,0804	99,14
0,001	1,00680	0,0799	0,0798	99,87
	1,00600	0,0799	0,0807	101,00
	1,02755	0,0816	0,0823	100,85
0,0015	1,00680	0,0804	0,0808	100,50
	1,00600	0,0804	0,0792	98,51
	1,02755	0,0821	0,0814	99,15

Полученные результаты свидетельствуют о том, что рассчитанный коэффициент Стьюдента меньше табличного значения и методика не содержит систематической ошибки, что позволяет сделать вывод о ее правильности.
Линейность методики оценили при построении градуировочного графика. Коэффициент корреляции R при этом не превышал 0,95, что говорит о линейности методики.
Выводы
В ходе проведенных исследований было установлено, что предложенные методики обладают удовлетворительной сходимостью, правильностью и линейностью. 

Введение

В настоящее время в связи с ухудшением экологической обстановки повышается потребность в средствах улучшения здоровья.  Дубильные вещества, называемые также танидами, и лекарственные медикаменты на их основе, часто используются при различных заболеваниях, так как обладают противовоспалительными, вяжущими, кровоостанавливающими и бактерицидными свойствами. Растительное сырье, содержащее конденсированные дубильные вещества, может использоваться в качестве антиоксидантных, антигипоксантных и противоопухолевых средств вследствие способности подавлять цепные свободнорадикальные реакции. Вследствие этого весьма  актуальна проблема определения  количественного содержания танидов в растительном сырье и выявления новых доступных растений, в особенности местной флоры.

Дубильные вещества – это группа полифенольных соединений, которые обладают дубящими свойствами и делятся на гидролизующиеся и негидролизующиеся (конденсированные) дубильные вещества. Таниды, в основном аморфные вещества, хорошо растворяются в некоторых спиртах и воде. В растворе дают слабокислую реакцию. Почти все дубильные вещества обладают оптической активностью. Значительная часть из них гигроскопичны. При взаимодействии дубильных веществ с алкалоидами, белками и солями тяжелых металлов образуются осадки, поэтому их запрещается смешивать в лекарственных препаратах.

Согласно литературным сведениям [1,2], комплекс фенольных соединений, содержащихся в различных видах мелиссы и мяты, состоит из флавоноидов и дубильных веществ, однако не акцентируется внимание на количественный состав танидов.

Целью данной работы являлось определение количественного состава мелиссы лекарственной, мелиссы турецкой и мяты лесной на содержание дубильных веществ.

Для количественного определения дубильных веществ в лекарственном растительном сырье, как правило используются титриметрические и спектрофотометрические методы вследствие их надежности и доступности.

Экспериментальная часть

Экстракция дубильных веществ из растительного сырья. Точную навеску сырья (около 2 г) просеивают через сито, имеющее диаметр отверстий 3 мм, переносят в коническую колбу объемом 500 мл, наливают 250 мл дистиллированной воды, предварительно нагретой до кипения, и кипятят, используя обратный холодильник, на электрической плитке в течение 30 минут при периодическом перемешивании. Далее охлаждают полученную водную вытяжку до комнатной температуры, доливают водой до первоначального объема 250 мл, затем фильтруют через ватный фильтр, чтобы в водное извлечение не попали частицы растительного сырья. Первые 50 мл полученного извлечения удаляют [3].

Определение общего количества дубильных веществ. 2-4 мл раствора (аликвотная проба) наливают в мерную колбу объемом 50 мл и доводят раствор до метки дистиллированной водой. Производят измерение оптической плотности оптической  раствора с помощью спектрофотометра (длина волны 370 нм). В качестве раствора сравнения используют воду.

Суммарное количество дубильных веществ рассчитывают по следующей формуле:

где, Х_А – содержание общего количества танидов, пересчитанного по галловой кислоте, %; D₁ – значение плотности оптической раствора; m – точное значение массы сырья в навеске (г); V – объем пробы (мл); 250 – количество общего объема раствора (мл); 50 – объем раствора (мл); 508 – значение плотности оптической 1%-го раствора кислоты галловой 1 мг/мл (значение удельного показателя поглощения галловой кислоты); W – содержание влаги в растительном сырье (%).

Обсуждение результатов

Сводные данные по результатам обнаружения дубильных веществ в экстрактах мяты лесной, мелиссы лекарственной и мелиссы турецкой представлены в таблице 1.

В результате проведенных исследований установлено, что исследуемые виды растительного сырья содержат от 4 до 5,1 % дубильных веществ. Выявлено, что мята лесная имеет большое содержание дубильных веществ по сравнению с исследуемыми видами мелиссы.

Заключение

Проведенные исследования подтверждают возможность использования водных экстрактов мяты лесной, также мелиссы лекарственной и мелиссы турецкой  для создания продукции с высокой биологической ценностью.

Дубильные вещества — аморфные вещества желтого или бурого цвета, растворимые в воде, спирте, ацетоне, пиридине, бутаноле, этилацетате и нерастворимые в хлороформе, бензоле, диэтиловом эфире и др. неполярных растворителях. В растворе дают слабокислую реакцию. В кристаллическом состоянии известны только катехины, они плохо растворимы в холодной воде, лучше в горячей. Многие дубильные вещества оптически активны. Большинство таннидов сильно гигроскопичны. В лекарственных смесях их нельзя смешивать с солями тяжелых металлов, белковыми веществами и алкалоидами, так как образуются осадки. Дубильные вещества с белками создают непроницаемую для воды пленку (дубление). Вызывая частичное свертывание белков, они образуют на слизистых оболочках и раневых поверхностях защитную пленку. При соприкосновении с воздухом (например, резке свежих корневищ) дубильные вещества легко окисляются, превращаясь во флобафены, которые обусловливают темно-бурую окраску многих кор и других органов, настоев [1].
Целью данной работы являлось определение количественного состава мяты на содержание дубильных веществ.
Для количественного определения дубильных веществ в лекарственном растительном сырье часто используется потенциометрический метод вследствие его надежности и доступности [2]. 

Экспериментальная часть

Экстракция дубильных веществ из растительного сырья. Точную навеску сырья (около 2 г) просеивают через сито, имеющее диаметр отверстий 3 мм, переносят в коническую колбу объемом 500 мл, наливают 250 мл дистиллированной воды, предварительно нагретой до кипения, и кипятят, используя обратный холодильник, на электрической плитке в течение 30 минут при периодическом перемешивании. Далее охлаждают полученную водную вытяжку до комнатной температуры, доливают водой до первоначального объема 250 мл, затем фильтруют через ватный фильтр, чтобы в водное извлечение не попали частицы растительного сырья. Первые 50 мл полученного извлечения удаляют [3].
Определение общего количества дубильных веществ. Отобрали 25 мл полученного извлечения в мерную колбу вместимостью 500 мл, добавили 25 мл 5% раствора кислоты серной, довели объем извлечения водой до метки и перемешали. Затем в химический стакан с помощью пипетки отмерили 50 мл полученного раствора и погрузили в него рабочий электрод и электрод сравнения. Титровали 0,02 М раствором перманганата калия с помощью микробюретки, постоянно перемешивая реакционную смесь. Добавляя по каплям перманганат калия фиксировали значения ЭДС.
По полученным результатам построили интегральную кривую титрования в координатах Е = f(V). Для более точного определения точки эквивалентности титрования построили дифференциальную кривую в координатах dE/ dV=f(V).
Суммарное количество дубильных веществ рассчитывают по следующей формуле: 

где где V – объем раствора калия перманганата (0,02 моль/л), пошедшего на титрование извлечения, мл; 0,004157 – количество дубильных веществ, соответствующее 1 мл раствора калия перманганата (0,02 моль/л) (в пересчете на танин), г; К- поправка на титр (по щавелевой кислоте); m – масса сырья, г; 20-разбавление; W- потеря в массе при высушивании сырья, %; 250 – общий объем извлечения, мл; 25 – объем извлечения, отобранного для титрования, мл.

Обсуждение результатов

Сводные данные по результатам обнаружения дубильных веществ в мяте представлены в таблице 1.

Таблица 1 – Результаты количественного определения дубильных веществ в мяте

В результате проведенных исследований установлено, что исследуемый вид растительного сырья содержат от 4,5643 % дубильных веществ. Выявлено, что мята имеет большое содержание дубильных веществ.

Заключение

Проведенные исследования показали возможность применения водных экстрактов мяты для создания лечебных препаратов с широким фармацевтическим спектром действия.